細(xì)胞培養(yǎng)是每個(gè)實(shí)驗(yàn)人員的必備技能，俗話說：細(xì)胞養(yǎng)得好，實(shí)驗(yàn)沒煩惱，然而事實(shí)卻是，實(shí)驗(yàn)室的小細(xì)胞們經(jīng)常容易“生病”，別人的培養(yǎng)基粉紅透亮，細(xì)胞長(zhǎng)勢(shì)喜人，而自己在細(xì)胞培養(yǎng)中卻經(jīng)常出現(xiàn)各種不明原因的渾濁和沉淀，這是什么情況呢?

一、細(xì)胞本身被污染

細(xì)菌、真菌和酵母污染，在這三種污染中，細(xì)菌污染是三者之中個(gè)性較強(qiáng)的一位，有一定的辨別難度，常見的細(xì)菌有：桿狀菌、球狀菌和螺旋狀菌。

支原體可是細(xì)胞的天敵，這是因?yàn)橹гw的平均直徑只有 0.1~0.3 μm ，這在顯微鏡下都無法識(shí)別，常用的檢查方法為培養(yǎng)檢測(cè)法，即取1mL細(xì)胞培養(yǎng)液加入支原體液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5天后，觀察培養(yǎng)基的顏色變化：如果變黃則懷疑該細(xì)胞受到支原體污染，如果不變色，則盲傳一代。

真核細(xì)胞污染是指一個(gè)細(xì)胞系中混入了其它細(xì)胞，由于各種細(xì)胞的外形大小差異甚微，這種污染同樣很難被識(shí)別。

二、水的影響

滅菌前加熱溶解過程中出現(xiàn)難溶物，這可能是水質(zhì)不佳（偏酸或偏堿或含有容易形成難溶物質(zhì)的金屬離子），多數(shù)培養(yǎng)基的制備需要使用純化水、去離子水配制，而天然水中含有較多的礦物鹽離子，若錯(cuò)誤的使用了自來水，礦泉水配制，或使用的純化水離子未除凈，都有可能導(dǎo)致培養(yǎng)基滅菌后岀現(xiàn)渾濁現(xiàn)象或沉淀。

失水誘導(dǎo)的濃度改變：如果培養(yǎng)基可能蒸發(fā)，培養(yǎng)基組分(包括鹽) 的濃度將會(huì)增加，特別是培養(yǎng)基表面可能容易形成晶體沉淀。

三、培養(yǎng)基組分的影響

制備無血清培養(yǎng)基時(shí)，組分添加的順序可能導(dǎo)致不可溶分子的形成。鈣鹽尤其容易沉淀，比如CaCl₂和MgSO₄在溶液中反應(yīng)產(chǎn)生CaSO₄晶體。

銅、鐵和鋅等金屬離子是細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的，是無血清培養(yǎng)基的重要補(bǔ)充物。培養(yǎng)系統(tǒng)中其他血清組分的缺失可能導(dǎo)致這些金屬沉淀，為細(xì)胞形成有毒的環(huán)境，在氧化條件下，銅和鋅更易于沉淀。

四、培養(yǎng)基PH不正確

偏酸或偏堿的pH有可能使培養(yǎng)基中的部分金屬離子產(chǎn)生沉淀。

五、容器不干凈

 新開封的容器或容器清洗不干凈，內(nèi)壁留有雜質(zhì)，都會(huì)導(dǎo)致滅菌后的培養(yǎng)基中有雜質(zhì)出現(xiàn)。

六、培養(yǎng)基本身有沉淀

培養(yǎng)基配方中無機(jī)鹽成分較多，或培養(yǎng)基本身含有不溶性成分，滅菌后會(huì)有沉淀存在，此為正?，F(xiàn)象，不影響使用。例如MC、TTB、BS等，配方中含有不溶物，滅菌后有沉淀。

七、溶解不充分

培養(yǎng)基滅菌前應(yīng)充分?jǐn)嚢柚镣耆芙猓娇蛇M(jìn)行滅菌。若滅菌前未將培養(yǎng)基溶解完全就進(jìn)行滅菌處理，滅菌后易出現(xiàn)絮狀或團(tuán)塊狀沉淀，如 Fraser培養(yǎng)基含有大量磷酸鹽，若滅菌前未進(jìn)行充分溶解，滅菌過程中磷酸鹽易結(jié)成塊滅菌后不溶解。

八、滅菌方式不正確或滅菌過度

滅菌前不經(jīng)過加熱溶解過程而是直接滅菌，滅菌過程中某些成分局部濃度過高也會(huì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)生成難溶性物質(zhì)。

再有一種情況：含有不耐熱成分的培養(yǎng)基，若滅菌過度或加熱過度，都有可能導(dǎo)致滅菌后的培養(yǎng)基顏色不正確或出現(xiàn)沉淀。如亞硒酸氫鈉胱氨酸増菌液(SC)，正常制備好的培養(yǎng)基應(yīng)為淡黃色透明液體，澄凊無沉淀，若加熱過度則培養(yǎng)基中亞硒酸氫鈉分最終制備的培養(yǎng)基會(huì)出現(xiàn)紅色沉淀。

九、添加劑加入時(shí)溫度不正確

在細(xì)胞培養(yǎng)中，溫度是引起沉淀的主要因素之一。當(dāng)遭遇溫度的極端變化時(shí)，高分子量血漿蛋白會(huì)從溶液中析出。

卵黃、血液等對(duì)溫度敏感的添加成分，若加入時(shí)溫度過高或溫差過大，易出現(xiàn)凝塊或絮狀沉淀。

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