大家是否確定細(xì)胞傳代數(shù)是什么意思？對(duì)如何計(jì)算它并跟蹤細(xì)胞培養(yǎng)物傳代數(shù)感到困惑？想知道細(xì)胞最大傳代數(shù)是否有上限嗎？

我們所說(shuō)的細(xì)胞傳代是什么意思？

如果提供足夠的空間、營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件，培養(yǎng)的細(xì)胞將呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)。然而，它們達(dá)到了一個(gè)空間變得有限的地步，如果不采取干預(yù)，細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)減慢，細(xì)胞會(huì)開始死亡。

這就是為什么需要定期檢查細(xì)胞的匯合度，一旦它們達(dá)到約80%的匯合度，需要“分裂”或傳代培養(yǎng)細(xì)胞。這也稱為細(xì)胞傳代。

那么什么是細(xì)胞傳代數(shù)呢？

細(xì)胞傳代數(shù)只是計(jì)算您分流或傳代細(xì)胞的次數(shù)。每次完成該過(guò)程時(shí)，應(yīng)該增加傳代數(shù) （p number）。傳代號(hào)通常寫在培養(yǎng)箱中的細(xì)胞培養(yǎng)瓶或板上，當(dāng)細(xì)胞冷凍時(shí)寫在凍存管上。這提供了一種簡(jiǎn)單易行的方法來(lái)跟蹤通道編號(hào)。

為什么我們需要監(jiān)測(cè)和記錄細(xì)胞傳代次數(shù)？

永生化細(xì)胞系，包括 HeLa、HEK293 和 U2OS 細(xì)胞，通常具有遺傳不穩(wěn)定性的特點(diǎn)，使其容易隨著時(shí)間的推移而變化。此外，培養(yǎng)條件可能會(huì)提供選擇性壓力，導(dǎo)致細(xì)胞群隨時(shí)間發(fā)生變化（例如，快速生長(zhǎng)的細(xì)胞將超過(guò)生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞）。因此，較低細(xì)胞傳代數(shù)（例如，p=3）的細(xì)胞組成可能與較高傳代細(xì)胞（例如，p=40）的細(xì)胞組成具有非常不同的特性和行為。原代細(xì)胞往往比永生化細(xì)胞的遺傳穩(wěn)定性高得多。然而，它們通常在一定數(shù)量的細(xì)胞傳代后會(huì)經(jīng)歷衰老，并且仍然會(huì)受到選擇壓力的影響。通過(guò)遺傳不穩(wěn)定或選擇壓力帶來(lái)的變化可能導(dǎo)致表型變化，并影響細(xì)胞對(duì)治療或?qū)嶒?yàn)條件的反應(yīng)。這可能會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。記錄傳代次數(shù)可以跟蹤細(xì)胞的“年齡”，建議在規(guī)定的傳代次數(shù)后停用細(xì)胞，以保持實(shí)驗(yàn)的可靠性。此外，還建議在進(jìn)行任何實(shí)驗(yàn)時(shí)記錄細(xì)胞的傳代次數(shù)，因?yàn)檫@樣，如果結(jié)果有任何異常，可以考慮傳代次數(shù)。

細(xì)胞的最大傳代數(shù)是多少？

我們所說(shuō)的高傳代細(xì)胞是什么意思？確定細(xì)胞的最大傳代數(shù)類似于詢問(wèn)一根繩子有多長(zhǎng)。就理論上可以傳代細(xì)胞多長(zhǎng)時(shí)間而言，這取決于細(xì)胞系。理論上，永生化細(xì)胞系可以無(wú)限傳代。然而，正如我們上面所討論的，隨著時(shí)間的推移，由于遺傳不穩(wěn)定性和選擇壓力，它們可能會(huì)經(jīng)歷表型和種群變化。實(shí)際上，應(yīng)限制細(xì)胞傳代以防止群體和遺傳漂變，理想情況下，應(yīng)使用相似的傳代數(shù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于細(xì)胞系，沒(méi)有定義的最大傳代次數(shù)，但強(qiáng)烈建議保持較低的傳代次數(shù)。然而，低的含義可能有所不同，一些建議建議將細(xì)胞傳代次數(shù)限制在不超過(guò) 10-20 次傳代，而醫(yī)療保健和制藥環(huán)境中的一般指南應(yīng)將傳代次數(shù)限制在最多 5 次。

關(guān)于標(biāo)記編號(hào)的常見問(wèn)題

我應(yīng)該從哪個(gè)編號(hào)開始？如果大家有一種新的細(xì)胞培養(yǎng)物，要么來(lái)自冷凍庫(kù)存，要么來(lái)自 ATCC 等供應(yīng)商，要么來(lái)自其他實(shí)驗(yàn)室。你是否重置標(biāo)記為第一次傳代，或者，也許從P0開始？

無(wú)論從何處采購(gòu)細(xì)胞儲(chǔ)備液，購(gòu)買的細(xì)胞可能已經(jīng)經(jīng)歷了多次傳代。供應(yīng)商應(yīng)告知您所購(gòu)買的庫(kù)存的通過(guò)編號(hào)，可能會(huì)發(fā)現(xiàn)需要為通過(guò)編號(hào)為2或更少的庫(kù)存支付溢價(jià)。如果要從實(shí)驗(yàn)室的冷凍供應(yīng)中檢索細(xì)胞原液或從其他實(shí)驗(yàn)室捐贈(zèng)細(xì)胞，則應(yīng)確保詢問(wèn)細(xì)胞的傳代次數(shù)。

然后，應(yīng)該從提供的傳代編號(hào)繼續(xù)傳代數(shù)。請(qǐng)注意，從原液中將細(xì)胞回收到培養(yǎng)物中的過(guò)程不算作一次傳代。

如果提供的原液的傳代編號(hào)為2，那么在最初培養(yǎng)它們的培養(yǎng)瓶上寫下的傳代編號(hào)為2。只有隨后對(duì)它們進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)，才會(huì)將傳代數(shù)增加到3。

凍融細(xì)胞算作一次傳代嗎？

上面的圖解釋了如何從細(xì)胞儲(chǔ)備液中設(shè)置傳代數(shù)。但是，如果自己冷凍細(xì)胞，然后解凍，那么冷凍和解凍細(xì)胞的過(guò)程算作一次傳代嗎？讓我們?cè)俅慰匆粋€(gè)視覺對(duì)象來(lái)幫助解釋這一點(diǎn)。假設(shè)有一個(gè)細(xì)胞儲(chǔ)備板，要將其冷凍以備后用，其傳代數(shù)為4。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，在準(zhǔn)備冷凍細(xì)胞之前，需要從板中胰蛋白酶消化（或以某種方式分離細(xì)胞）。此步驟是傳代培養(yǎng)步驟，這意味著冷凍原液的傳代次數(shù)應(yīng)增加1至5。這意味著可以在樣品瓶上寫下這些原液的 p=5。當(dāng)?shù)谝淮位厥占?xì)胞時(shí)，不需要增加這個(gè)數(shù)字，只需在隨后傳代它們時(shí)增加它們。

如何保持低傳代數(shù)？

1. 從信譽(yù)良好的手機(jī)來(lái)源購(gòu)買細(xì)胞，例如 ATCC。

從有問(wèn)題的供應(yīng)商處購(gòu)買儲(chǔ)液或從其他實(shí)驗(yàn)室獲得儲(chǔ)液意味著可能沒(méi)有可靠的傳代數(shù)，因?yàn)槔鋬龊蛡鞔囵B(yǎng)方案以及傳代數(shù)分配方式各不相同。

2. 盡早凍結(jié)庫(kù)存。

當(dāng)您獲得并恢復(fù)您的種群時(shí)，應(yīng)該傳代它們，然后凍結(jié)第一輪傳代的種群（圖 3）。這提供了一組低傳代數(shù)的庫(kù)存，當(dāng)工作庫(kù)存達(dá)到傳代上限時(shí)，可以返回。

文章來(lái)源：環(huán)凱轉(zhuǎn)載于“ 智者不學(xué)生物”公眾號(hào)；原標(biāo)題：“你真的了解細(xì)胞代次的意思嗎？如何計(jì)算細(xì)胞傳代次數(shù)？”；作者~腌制油梨。
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