產(chǎn)品名稱：溶藻弧菌核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
英文名稱：PCR Detection Kit for Vibrio alginolyticus (Fluorescent Probe Assay)

產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：

產(chǎn)品簡介：本試劑盒適用于食品、水產(chǎn)樣本中溶藻弧菌的檢測。

檢測原理：基于Real Time PCR技術(shù)，針對溶藻弧菌特異性基因設(shè)計引物和熒光探針并優(yōu)化反應(yīng)所需試劑組分，加入待檢樣品核酸即可進行擴增反應(yīng)。在擴增過程中，熒光探針與目的基因片段結(jié)合，可被Taq酶分解并產(chǎn)生熒光信號，此時熒光定量PCR儀可識別該熒光信號，同時根據(jù)其強弱變化繪制出相應(yīng)的實時擴增曲線，進而判定溶藻弧菌是否檢出。

溶藻弧菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)產(chǎn)品組分：

儲存條件與保質(zhì)期：-20℃儲存，有效期為12個月，避免反復(fù)凍融。

靈敏度：最低檢驗限達到 100 CFU/Test

所需其他材料和適用儀器：熒光定量PCR儀（具有能夠檢測FAM標記的熒光通道）、高速離心機、移液器、移液槍頭及離心管等。

溶藻弧菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)使用指南：

1，樣品前處理

   1) 樣品增菌液模板 DNA 的制備：
         a) 樣品增菌：參照NKML NO.156進行樣品制備和增菌，取樣品20g（mL），加入到含鹽2％的200mL堿性蛋白胨水中42.0±1.0℃培養(yǎng)18±2h；
         b) 吸增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中，6000 r/min離心5 min，完全去除上清；
         c) 加入30 μL裂解液，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min；
         d) 12000 r/min離心15 min，上清即為粗提的DNA，可轉(zhuǎn)移至0.2 mL無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。

   2) 可疑菌落模板 DNA 的制備：挑取可疑菌落，充分懸浮于預(yù)先加有30 μL裂解液的無菌離心管中，后按照上述步驟c)、d)操作。

2, 加樣、反應(yīng)

   1) 按照需求取n個PCR反應(yīng)管（n=待檢測樣品數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照），從試劑盒中取出預(yù)混液，充分融化，渦旋振蕩后短暫離心，向以上每個PCR管中加入20 μL預(yù)混液。
   2) 向上述n個反應(yīng)管中分別按順序加入陰性對照、待測樣品DNA、陽性對照各5 μL，加樣后立刻蓋緊管蓋，短暫離心，立即進行PCR擴增反應(yīng)。
   3) PCR反應(yīng)體系為25 μL，設(shè)置FAM檢測通道讀取，在反應(yīng)階段2中60℃時收集熒光信號，具體程序如下：

3, 結(jié)果：一般情況下，可通過軟件自動設(shè)定的基線、閾值等直接讀取檢測結(jié)果。如需調(diào)整，可根據(jù)所使用儀器的自身情況（如噪聲等）以及選取的不同熒光通道進行調(diào)整。

   1) 質(zhì)量控制：陰性對照未出現(xiàn)明顯的S型擴增曲線或Ct值＞37，陽性對照出現(xiàn)S型擴增曲線且其Ct值＜30。若陰陽性對照不同時滿足上述條件，則本次檢測結(jié)果無效，應(yīng)重新檢測或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。

   2) 結(jié)果判讀：（根據(jù)反應(yīng)所得Ct值判讀，具體見下表：）

更多實時熒光PCR檢測試劑盒(食源性致病菌檢測系列) 產(chǎn)品列表：

• FZ013BF2 溶藻弧菌核酸檢測試劑盒 產(chǎn)品使用說明書