產(chǎn)品名稱：嗜肺軍團(tuán)菌核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）
英文名稱：PCR Detection Kit for Legionella pneumophila (Fluorescent Probe Assay)

產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本試劑盒適用于飲用水、非飲用水、公共場(chǎng)所環(huán)境樣本中嗜肺軍團(tuán)菌的檢測(cè)。

檢測(cè)原理：基于Real Time PCR技術(shù)，針對(duì)嗜肺軍團(tuán)菌特異性基因mip設(shè)計(jì)引物和熒光探針并優(yōu)化反應(yīng)所需試劑組分，加入待檢樣品核酸即可進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。在擴(kuò)增過程中，熒光探針與目的基因片段結(jié)合，可被Taq酶分解并產(chǎn)生熒光信號(hào)，此時(shí)熒光定量PCR儀可識(shí)別該熒光信號(hào)，同時(shí)根據(jù)其強(qiáng)弱變化繪制出相應(yīng)的實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線，進(jìn)而判定嗜肺軍團(tuán)菌是否檢出。

嗜肺軍團(tuán)菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)產(chǎn)品組分：

儲(chǔ)存條件與保質(zhì)期：-20℃儲(chǔ)存，有效期為12個(gè)月，避免反復(fù)凍融。

靈敏度：最低檢驗(yàn)限達(dá)到100 CFU/Test

所需其他材料和適用儀器：熒光定量PCR儀（具有能夠檢測(cè)FAM標(biāo)記的熒光通道）、高速離心機(jī)、移液器、移液槍頭及離心管等。

嗜肺軍團(tuán)菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)使用指南：

1，樣品前處理

   1) 樣品增菌液模板 DNA 的制備：
         a) 取樣過程參考國標(biāo)《GB/T 18204.3-2025公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法 第3部分：空氣微生物》，或各實(shí)驗(yàn)室自行建立的方法；
         b) 吸取采樣后的吸收液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中，12000r/min離心5 min，完全去除上清；
         c) 加入30 μL裂解液，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，100℃加熱5-10 min；
         d) 12000 r/min離心2 min，上清即為粗提的DNA，可轉(zhuǎn)移至0.2 mL無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。

   2) 可疑菌落模板 DNA 的制備：挑取可疑菌落，充分懸浮于預(yù)先加有30 μL裂解液的無菌離心管中，后按照上述步驟c)、d)操作。

2, 加樣、反應(yīng)

   1) 按照需求取n個(gè)PCR反應(yīng)管（n=待檢測(cè)樣品數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照），從試劑盒中取出預(yù)混液，充分融化，渦旋振蕩后短暫離心，向以上每個(gè)PCR管中加入20 μL預(yù)混液。
   2) 向上述n個(gè)反應(yīng)管中分別按順序加入陰性對(duì)照、待測(cè)樣品DNA、陽性對(duì)照各5 μL，加樣后立刻蓋緊管蓋，短暫離心，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
   3) PCR反應(yīng)體系為25 μL，設(shè)置FAM檢測(cè)通道讀取，在反應(yīng)階段2中60℃時(shí)收集熒光信號(hào)，具體程序如下：

3, 結(jié)果：一般情況下，可通過軟件自動(dòng)設(shè)定的基線、閾值等直接讀取檢測(cè)結(jié)果。如需調(diào)整，可根據(jù)所使用儀器的自身情況（如噪聲等）以及選取的不同熒光通道進(jìn)行調(diào)整。

   1) 質(zhì)量控制：陰性對(duì)照未出現(xiàn)明顯的S型擴(kuò)增曲線或Ct值＞39，陽性對(duì)照出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線且其Ct值＜30。若陰陽性對(duì)照不同時(shí)滿足上述條件，則本次檢測(cè)結(jié)果無效，應(yīng)重新檢測(cè)或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。

   2) 結(jié)果判讀：（根據(jù)反應(yīng)所得Ct值判讀，具體見下表：）

• FZ015BF2 嗜肺軍團(tuán)菌核酸檢測(cè)試劑盒 產(chǎn)品使用說明書